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液氮超低温冻结保藏

作者:天驰液氮罐 来源:原创 日期:2014-05-29 9:29:06 人气:117 加入收藏 标签:液氮超低温 液氮保藏

液氮超低温冻结保藏

1. 冻存管的准备

进口2.0 ml已灭菌内螺旋冻存管。型号:Corning 2028, Corning公司。

2. 保护剂的准备

分析纯甘油加纯水配制成20%浓度,灭菌。

3. 微生物保藏物的准备

微生物不同的生理状态对存活率有影响,一般使用静止期或成熟期培养物。菌种的准备可采用下列两种方法:

1)刮取培养物平板上的孢子或菌体,与保护剂混匀后加入冻存管内;

2) 接种液体培养基,振荡培养后将菌悬液离心,去上清,将菌体与保护剂混合分装于冻存管内。

每个冻存管的分装量为1ml。

冻存管的标记为管外标记,用专用的非水溶性记号笔标记菌种保藏编号与保藏日期。

注意:分装与标记时要多次核对该菌种与所分装管的标记是否正确无误。

4. 预冻

使用分段降温法:将分装后的菌种管先放4oC冰箱,半小时后放-20℃冰箱中2小时,然后放80oC冰箱2小时以上, 取出后放入液氮罐中快速冷冻。

对耐低温的微生物可以直接放入气相或液相氮中。

5. 保藏

将塑料冻存管置于液氮罐中保藏。一般气相中温度为-150℃,液相中温度为-196℃。

6. 保藏周期

一般10年以上。

7. 复苏方法

从液氮罐中取出冻存管,立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止,一般约需50秒-100秒。开启冻存管,将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

8. 适用范围

各类微生物。

9. 液氮保藏应注意事项

防止冻伤,操作注意安全,带面罩及防冻手套;

塑料冻存管一定要拧紧螺帽;

运送液氮时一定要用专用特制的容器,绝不可用密闭容器存放或运输液氮,切勿使用保温瓶存放液氮;

注意存放液氮容器的室内通风,防止过量氮气使人窒息;

防止塑料冻存管破裂爆炸,如液氮渗入管内,当从液氮容器取出时,液态氮体积膨胀约680倍,爆炸力很大,应特别小心;

注意观察液氮容器中液氮的残存量,定期补充液氮。

10. 质量检查

保存一段时间后抽取1-2支冻存管进行各项指标检查,如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。

本文网址:http://www.tianchiyedanguan.com/Industry/715.html
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